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一文讀懂不同活性氧檢測試劑盒的工作原理

更新時(shí)間:2025-11-17點(diǎn)擊次數(shù):62
   不同活性氧檢測試劑盒基于不同的檢測原理,各有其特點(diǎn)和適用范圍。在實(shí)際應(yīng)用中,需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹颖绢愋鸵约皺z測條件等因素綜合考慮,選擇合適的試劑盒,以準(zhǔn)確檢測活性氧水平,為相關(guān)研究提供可靠的數(shù)據(jù)支持?;钚匝酰≧OS)是生物體內(nèi)一類具有高活性的含氧化合物,包括超氧陰離子、過氧化氫、羥基自由基等。它們在細(xì)胞信號傳導(dǎo)、免疫防御等生理過程中發(fā)揮重要作用,但過量產(chǎn)生會導(dǎo)致氧化應(yīng)激,損傷細(xì)胞成分,與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此,準(zhǔn)確檢測活性氧水平對研究細(xì)胞生理病理機(jī)制意義重大,而活性氧檢測試劑盒就是常用的檢測工具,不同試劑盒工作原理有所不同。
 
  化學(xué)發(fā)光法檢測試劑盒
 
  這類試劑盒主要基于活性氧與特定化學(xué)發(fā)光物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生光子的原理。例如,常見的魯米諾在活性氧(如過氧化氫,在辣根過氧化物酶的催化下)作用下,會發(fā)生氧化反應(yīng),反應(yīng)過程中產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體,當(dāng)這些中間體回到基態(tài)時(shí),就會釋放出光子。通過檢測光子的強(qiáng)度,就可以間接反映活性氧的含量。光子強(qiáng)度與活性氧的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,利用專門的發(fā)光檢測儀器測量光子信號,經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)后就能確定樣本中活性氧的水平。
 
  熒光法檢測試劑盒
 
  熒光法是應(yīng)用較為廣泛的檢測方式。其原理是利用能與活性氧特異性結(jié)合的熒光探針。這些探針本身沒有熒光或者熒光較弱,當(dāng)與活性氧發(fā)生反應(yīng)后,探針的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而產(chǎn)生熒光或者熒光強(qiáng)度發(fā)生變化。比如,二氯二氫熒光素二乙酯(DCFH-DAE)是一種常用的檢測活性氧的熒光探針,它本身無熒光,進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解成DCFH,DCFH無熒光,但可被活性氧氧化成熒光物質(zhì)DCF,熒光強(qiáng)度與活性氧的量相關(guān)。通過熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光分光光度計(jì)等設(shè)備檢測熒光信號的強(qiáng)弱,進(jìn)而對活性氧進(jìn)行定量或定性分析。
 
  比色法檢測試劑盒
 
  比色法檢測試劑盒依據(jù)活性氧與特定顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化的特性來檢測。當(dāng)活性氧與顯色劑作用時(shí),會使顯色劑的顏色發(fā)生深淺變化,這種顏色變化與活性氧的含量存在對應(yīng)關(guān)系。例如,某些試劑盒中的顯色劑在與過氧化氫反應(yīng)后,會生成有色產(chǎn)物,通過使用分光光度計(jì)測量溶液在特定波長下的吸光度,再根據(jù)預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,就可以計(jì)算出樣本中活性氧的濃度。這種方法操作相對簡單,不需要昂貴的檢測設(shè)備,適合一些對檢測條件要求不高的場合。
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